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Kann Ihre stationäre Phase unter 100% wässrigen Bedingungen eingesetzt werden?
Was bedeutet es, wenn eine stationäre Phase vollständig benetzbar ist? Nehmen wir die HALO® AQ-C18 als Beispiel. Diese Phase kann unter 100% wässrigen Bedingungen ohne Einbusse der Retentionszeit eingesetzt werden, wenn die Pumpe nach dem Anhalten wieder gestartet wird.
Da sich die stationäre Phase hauptsächlich in den Poren der Partikel befindet, finden die meisten Wechselwirkungen, die zur Retention beitragen, hier statt. Eine kleine Porengröße und eine sehr hydrophobe stationäre Phase, wie z. B. C18, machen es für 100 % wässrige mobile Phasen schwierig, in die Poren zu gelangen.
Wenn die Pumpe gestoppt wird und die Säule nicht mehr unter Druck steht, zieht sich die 100% wässrige mobile Phase aus den Poren zurück. Wird die Pumpe neu gestartet, ist die mobile Phase nicht mehr in der Lage, die Poren zu benetzen und die Retention der Analyten wird reduziert.
Um die Poren wieder zu benetzen, verwendet man am Besten eine Kombination aus Wasser und organischer mobiler Phase. Damit erreicht man, dass die Retention wieder gleich ist, wie vor dem Austritt der 100% wässrigen mobilen Phase aus den Poren.
Wenn eine stationäre Phasen nicht vollständig benetzbar ist, kann die Reproduzierbarkeit der Retentionszeiten für früh eluierenden Verbindungen leiden, wenn der Gradient keine oder nur wenig organische Komponenten enthält.
Mit einer 100% benetzbaren Phase wie der HALO® AQ-C18 besteht das Problem des Retentionsverlustes nicht. Dies ist ein grosser Vorteil, wenn Proben wie Metaboliten, die polare Analyten enthalten, analysiert werden, da der Startgradient 100% wässrig sein kann.
HALO® AQ-C18-Phase
Die HALO® AQ-C18-Phase ist ideal für den Einsatz mit hochwässrigen mobilen Phasen in der Umkehrphasenchromatographie, insbesondere im Vergleich mit der hydrophoben HALO® C18-Phase, die im Einsatz mit einer 100 % wässrigen mobilen Phasen entnetzt wird.
Eine wässrige Umgebung kann viele Trennvorteile bieten insbesondere bei hochpolaren Verbindungen. Ideal ist die HALO® AQ-C18-Säule zum Beispiel, wenn organische Säuren wie Ascorbinsäure, Zitronensäure und Milchsäure analysiert werden, da diese Verbindungen sehr polar sind, weshalb mit einer stark wässrigen mobilen Phase gearbeitet werden muss.
